Kit d'extraction

Kit d'extraction pour l'ARN

Desciption Produit

Ce kit a été optimisé pour un nombre de 10 000 à 2 000 000 cellules comme matériel de départ et fournis 2 à 25 µg d'ARN total. Utilisez ce Kit en combinaison avec le kit d'amplification ''MiniAmp mRNA'' et le kit de marquage ''Amino Allyl''.
L'échnatillon de départ peut provenir du sang, des cellules ou de tissus.
Ce kit est utilisé pour la préparartion d'ARN hautement purifié provenant d'échantillons de tissus ou de cellules. Il peut être aussi utilisé pour isoler l'ARN à partir de tissus et de cellules y compris les plantes, les animaux, les cellules de levures et les protozoaires.
L'ARN extrait peut être utilisé directement pour les techniques de ''Northern blot'' et de ''In vitro Translation'' ou bien comme matériel de départ pour la purification de l'ARNm nécessaire à la synthèse d'ADN.
 
Référence Désignation
REK Total RNA Extraction Kit (pour 10 réactions)

Caractéristiques Techniques & Protocole

Equipements nécessaires

• Tubes de 1,5 ml
• Ethanol (100%)
• De la glace pour les incubations
• Micropipettes
• Agitateur
• Mini-centrifugeuse

Contenance du Kit

Articles Conditionnement Stockage
RBC Lysis Buffer 25ml in 30ml bottle -20°C Freezer
RNA Extraction Buffer 1.1ml in 2ml tube 20-25°C
RNA Wash Buffer Concentrate 0.5ml in 8ml bottle 20-25°C
RNA Micro Column 10 each 20-25°C
Elution Tube (1.5ml) 10 each 20-25°C
2 ml Wash Tube 10 each 20-25°C
Nuclease Free Water 1.5ml in 2ml tube -20oC Freezer

Protocole d'extraction d'ARN provenant du sang, de cellules et de tissus.

1. Centrifuger tous les tubes pendant 5 à 10s avant utilisation
2. Ajouter 2 ml d'éthanol à 100% à la concentration de solution de lavage d'ARN.
3. Injecter les 200 µl de sang, cellules ou de tissus dans les 2 ml dans le tampon RBC Lysis et incuber dans de la glace pendant 15 mn. Cette étape n'est pas nécessaire pour les cellules provenant de culture.
4. Recueillir le culot de cellule par centrifugation à 500g pendant 5 mn.
5. Retirer le surnageant
6. Ajouter 100µl de tampon d'extraction d'ARN au culot de cellules et resuspendre doucement à la pipette.
7. Homogénéiser l'échantillon à l'aide d'une seringue jetable de 1ml avec une aiguille de calibration 20 (5 à 8 fois).
8.Centrifiger 1 sec à basse vitesse. Si un culot de cellules de forme répéter l'homogénéisation, sinon procéder à l'extraction.
9. Incuber dans de la glace pendant 20 minutes.
10. Ajouter 100 µl d'éthanol à 100 %, mélanger brièvement et incuber dans de la lace pendant 10 minutes.
11. Mettre l'intégralité du contenu dans une colonne d'ARN et la mettre dans un tube de lavage de 2 ml.
12. Centrifuger pendant 1 mn à haute vitesse (10 000 rpm). Jeter le surplus de fluide et réutiliser le tube de lavage.
13. Additionner 100 µl de solution de lavage pour ARN dans la colonne et centrifuger pendant 1 mn à grande vitesse (10 000 rpm). Une centrifugation plus longue peut être nécessaire pour enlever la solution de lavage résiduelle.
14. Jeter le tube de lavage de 2 ml et placer soigneusement la colonne dans u tube d'élution.
15. Ajouter 40 µl d'eau sans nucléase et préchauffer à 60°C dans le centre de la colonne.
16. Incuber pendant 2 mn et centrifuger à grande vitesse (10 000 rpm) pendant 1 mn.
17. Recharger le filtrat sur la colonne et incuber pendant 2 minutes. Centrifuger à grande vitesse (10 000 rpm) pendant 1 mn.
18. Jeter la colonne et utiliser l'ARN total pour des applications en aval.